scbmtБИОМЕДИЦИНАJournal Biomed2074-59822713-0428Scientific center of biomedical technologies of Federal Medical and Biological Agency10.33647/2074-5982-20-1-8-20scbmt-1560Research ArticleМЕТОДЫ И ТЕХНОЛОГИИ БИОМЕДИЦИНСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙMETHODS AND TECHNOLOGIES OF BIOMEDICAL RESEARCHПринципы создания генно-инженерной конструкции для получения гуманизированных трансгенных мышей, несущих ген HLA-С*07:02:01:01, как прообраз инновационных трансгенно-нокаутных биомоделейPrinciples of Creation of a Genetic Engineering Construction for Obtaining Humanized Transgenic Mice with HLA-C*07:02:01:01, as a Promote of Innovative Transgenic and Knockout BiomodelsКаркищенкоН. Н.KarkischenkoN. N.

Каркищенко Николай Николаевич, д.м.н., проф., акад. РАРАН, чл.-корр. РАН

143442, Московская обл., Красногорский р-н, п. Светлые горы, 1

Nikolay N. Karkischenko, Dr. Sci. (Med.), Prof., Academician of the Russian Academy of Rocket and Artillery Sciences, Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia

143442, Moscow Region, Krasnogorsk District, Svetlye gory Village, 1

niknik2808@yandex.ruЛазаревВ. Н.LazarevV. N.

Лазарев Василий Николаевич, д.б.н., доц.

ФМБА России» 119435, Москва, Малая Пироговская ул., 1а

Vassili N. Lazarev, Dr. Sci. (Biol.), Assoc. Prof., Lopukhin Federal Research And Clinical Center of Physical-Chemical Medicine of the Federal Medical and Biological Agency of Russia

119435, Moscow, Malaya Pirogovskaya Str., 1a

lazar0@mail.ruМанувераВ. А.ManuveraV. A.

Манувера Валентин Александрович, к.б.н.

ФМБА России» 119435, Москва, Малая Пироговская ул., 1а

Valentin A. Manuvera, Cand. Sci. (Biol.), Lopukhin Federal Research And Clinical Center of Physical-Chemical Medicine of the Federal Medical and Biological Agency of Russia

119435, Moscow, Malaya Pirogovskaya Str., 1a

vmanuvera@yandex.ruБобровскийП. А.BobrovskyP. A.

Бобровский Павел Александрович, к.б.н.

ФМБА России» 119435, Москва, Малая Пироговская ул., 1а

Pavel A. Bobrovsky, Cand. Sci. (Biol.), Lopukhin Federal Research And Clinical Center of Physical-Chemical Medicine of the Federal Medical and Biological Agency of Russia

119435, Moscow, Malaya Pirogovskaya Str., 1a

pbobrovskiy@gmail.comПетроваН. В.PetrovaN. V.

Петрова Наталья Владимировна

143442, Московская обл., Красногорский р-н, п. Светлые горы, 1

Natalia V. Petrova, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia

143442, Moscow Region, Krasnogorsk District, Svetlye gory Village, 1

m-sklad@yandex.ruКолосковаЕ. М.KoloskovaE. M.

Колоскова Елена Михайловна, к.б.н., 

249013, Калужская обл., Боровск, п. Институт

Elena M. Koloskova, Cand. Sci. (Biol.), All-Russian Research Institute of Physiology, Biochemistry and Animal Nutrition — branch of the Federal Scientific Centre of Animal Husbandry — All-Russian Institute of Animal Husbandry named after acad. L.K. Ernst

249013, Kaluga Region, Borovsk, Institut Village

heleko3@yandex.ruГлотоваЕ. С.GlotovaE. S.

Глотова Елена Сергеевна

143442, Московская обл., Красногорский р-н, п. Светлые горы, 1

Elena S. Glotova, Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia

143442, Moscow Region, Krasnogorsk District, Svetlye gory Village, 1

savelaine@gmail.comФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»РоссияScientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of RussiaRussian FederationФГБУ «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины имени академика Ю.М. ЛопухинаРоссияLopukhin Federal Research and Clinical Center of Physical-Chemical Medicine of the Federal Medical and Biological Agency of RussiaRussian FederationВсероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных – филиал ФГБНУ «Федеральный научный центр животноводства – ВИЖ им. акад. Л.К. Эрнста»РоссияAll-Russian Research Institute of Physiology, Biochemistry and Animal Nutrition — branch of the Federal Scientific Centre of Animal Husbandry — All-Russian Institute of Animal Husbandry named after acad. L.K. ErnstRussian Federation202405042024201820Copyright © Каркищенко Н.Н., Лазарев В.Н., Манувера В.А., Бобровский П.А., Петрова Н.В., Колоскова Е.М., Глотова Е.С., 20242024Каркищенко Н.Н., Лазарев В.Н., Манувера В.А., Бобровский П.А., Петрова Н.В., Колоскова Е.М., Глотова Е.С.Karkischenko N.N., Lazarev V.N., Manuvera V.A., Bobrovsky P.A., Petrova N.V., Koloskova E.M., Glotova E.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.scbmt.ru/jour/article/view/1560

Генетические отличия у представителей разных популяций оказывают влияние на механизм и эффективность лекарственных препаратов. Биомодели, учитывающие особенности генетического полиморфизма разных людей, позволяют полнее исследовать молекулярно-генетические механизмы действия фармакологических средств, включая иммунобиологические. Была создана рекомбинантная ДНК, кодирующая гибридный белок класса I MHC, содержащий ß2-микроглобулин человека, слитый с антигенпрезентирующими доменами (α1и α2-домены) молекулы HLA-С*07:02:01:01, и α3-домен Н2-комплекса мыши. Очищенный линеаризованный фрагмент ДНК, содержащий целевую конструкцию, фланкированный регуляторными фрагментами, обеспечивающими его стабильную транскрипцию, использован для получения новой линии гуманизированных трансгенных мышей. Принципы конструирования гуманизированных трансгенных мышей путем кодирования химерного белка MHC класса I, содержащего антигенпрезентирующие домены HLA-С*07:02:01:01, аналогичны таковым при получении мышей гуманизированных трансгенных линий HLA-А*02:01:01:01 и HLA-B*18:01:01:02. Данные трансгенные линии лабораторных мышей являются самостоятельными биомоделями, а также используются в качестве базовых линий для получения на их основе соответствующих трансгенно-нокаутных линий.

Genetic differences in different populations influence the mechanism and efficacy of drugs. Biomodels that take into account the peculiarities of genetic polymorphism in different individuals allow to more fully investigate the molecular-genetic mechanisms of action of pharmacological agents, including immunobiological ones. Recombinant DNA encoding a hybrid MHC class I protein containing human ß2-microglobulin fused with antigen-presenting domains (α1 and α2 domains) of the HLA-C*07:02:01:01 molecule and α3 domain of the mouse H2-complex was created. The purified linearized DNA fragment containing the target construct flanked by regulatory fragments ensuring its stable transcription was used to obtain a new line of humanized transgenic mice. The principles of designing humanized transgenic mice by encoding a chimeric MHC class I protein containing antigen-presenting domains HLA-C*07:02:01:01 are similar to those for obtaining mice of the HLA-А*02:01:01 and HLA-B*18:01:01:02 humanized transgenic lines. These transgenic lines of laboratory mice are independent biomodels, and also be used as baselines for obtaining corresponding transgenic and knockout lines.

генетическая конструкцияHLA-С*07:02:01:01трансгенозгуманизированные трансгенные мышиgenetic designHLA-C*07:02:01:01transgenosishumanized transgenic miceработа выполнена в рамках государственного задания ФГБУН НЦБМТ ФМБА России по теме «Получение новой линии гуманизированных трансгенных мышей, несущих ген HLA-A*pX человека и нокаут комплекса H-2K мыши» (шифр: «Транснокаут-2024»).the article was carried out within the framework of the state assignment of the Scientific Center of Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia on the topic “Obtaining a new line of humanized transgenic mice carrying the human HLA-A*pX gene and knockout of the mouse H-2K complex” (code: “Transknockout-2024”).ReferencesЗубкова О.В., Ожаровская Т.А., Должикова И.В., Попова О., Щебляков Д.В. Гроусова Д.М., Джаруллаева А.Ш., Тухватулин А.И., Тухватулина Н.М., Щербинин Д.Н., Есмагамбетов И.Б., Токарская Е.А., Ботиков А.Г., Ерохова А.С., Ижаева Ф.М., Семихин А.С., Борисевич С.В., Народицкий Б.С., Логунов Д.Ю., Гинцбург А.Л. Фармацевтическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты). Патент РФ № 2731342 C1, 2020.Zubkova O.V., Ozharovskaya T.A., Dolzhikova I.V., Popova O., Shcheblyakov D.V. Grousova D.M., Dzharullayeva A.Sh., Tukhvatulin A.I., Tukhvatulina N.M., Shcherbinin D.N., Esmagambetov I.B., Tokarskaya E.A., Botikov A.G., Erokhova A.S., Izhaeva F.M., Semikhin A.S., Borisevich S.V., Naroditsky B.S., Logunov D.Yu., Ginzburg A.L. Pharmacevticheskoe sredstvo I sposob ego ispolzovania dlya indukcii specificheskogo immuniteta protiv virusa tyazhelogo ostrogo respiratornogo sindroma SARS-CoV-2 (variantyi) [A pharmaceutical product and a method of its use for the induction of specific immunity against the SARS-CoV-2 severe acute respiratory syndrome virus (variants)]. Patent RU No. 2731342 C1, 2020. (In Russian).Каркищенко В.Н., Болотских Л.А., Капанадзе Г.Д., Каркищенко Н.Н., Колоскова Е.М., Максименко С.В., Матвеенко Е.Л., Петрова Н.В., Рябых В.П., Ревякин А.О., Станкова Н.В., Семенов Х.Х. Создание линий трансгенных животных-моделей с генами человека NAT1 и NAT2. Биомедицина. 2016;1:74–84.Karkischenko V.N., Bolotskikh L.A., Kapanadze G.D., Karkischenko N.N., Koloskova E.M., Maksimenko S.V., Matveyenko E.L., Petrova N.V., Ryabykh V.P., Revyakin A.O., Stankova N.V., Semenov Kh.Kh. Sozdaniye liniy transgennykh zhivotnykh-modeley s genami cheloveka NAT1 i NAT2 [Creation of lines of transgenic animal models with human genes NAT1 and NAT2]. Biomeditsina [Journal Biomed]. 2016;1:74–84. (In Russian).Каркищенко В.Н., Петрова Н.В., Савченко Е.С., Огнева Н.С., Колоскова Е.М., Максименко С.В., Манувера В.А., Бобровский П.А., Лазарев В.Н. Создание полных гибридных ДНК-конструкций с геном человека HLA-A*02:01:01:01. Биомедицина. 2021;17(1):10–23.Karkischenko V.N., Petrova N.V., Savchenko E.S., Ogneva N.S., Koloskova E.M., Maksimenko S.V., Manuvera V.A., Bobrovsky P.A., Lazarev V.N. Sozdanie polnih gibritnih DNKkonstrukcij s genom cheloveka HLA-A*02:01:01:01 [Chimeric Construct Engineering with Human Variant HLA-A*02:01:01:01]. Biomeditsina [Journal Biomed]. 2021;17(1):10–23. (In Russian).Каркищенко В.Н., Рябых В.П., Каркищенко Н.Н., Дуля М.С., Езерский В.А., Колоскова Е.М., Лазарев В.Н., Максименко С.В., Петрова Н.В., Столярова В.Н., Трубицына Т.П. Молекулярногенетические аспекты технологии получения трансгенных мышей с интегрированными генами N-ацетилтрансферазы (NAT1 и NAT2) человека. Биомедицина. 2016;1:4–17.Karkischenko V.N., Ryabykh V.P., Karkischenko N.N., Dulya M.S., Ezerskiy V.A., Koloskova E.M., Lazarev V.N., Maksimenko S.V., Petrova N.V., Stolyarova V.N., Trubitsyna T.P. Molekulyarno-geneticheskie aspekty tekhnologii polucheniya transgennykh myshej s integrirovannymi genami N-atsetiltransferazy (NAT1 i NAT2) cheloveka [Molecular and genetic aspects of the technology for producing transgenic mice with integrated genes of human N-acetyltransferase (NAT1 and NAT2)]. Biomeditsina [Journal Biomed]. 2016;1:4–17. (In Russian).Каркищенко Н.Н., Глотова Е.С., Петрова Н.В., Слободенюк В.В., Ларюшина Н.А., Петров Д.В., Васильева И.А., Дерябин К.Е. Генетический скрининг новой трансгенной гуманизированной по HLA-A*02:01:01:01 и hβ2m линии мышей. Биомедицина. 2023;19(3Е):10–24.Karkischenko N.N., Glotova E.S., Petrova N.V., Slobodenyuk V.V., Laryushina N.A., Petrov D.V., Vasil’eva I.A. Deryabin K.E. Geneticheskij skrining novoj transgennoj gymanizirovannoj po HLA-A*02:01:01:01 i hβ2m linii myshey [Genetic screening of a new transgenic mouse line humanized for HLA-A*02:01:01:01 and hβ2m]. Biomeditsina [Journal Biomed]. 2023;19(3Е):10–24. (In Russian).Каркищенко Н.Н., Рябых В.П., Каркищенко В.Н., Колоскова Е.М. Создание гуманизированных мышей для фармакотоксикологических исследований (успехи, неудачи и перспективы). Биомедицина. 2014;1(3):4–22.Karkischenko N.N., Ryabykh V.P., Karkischenko V.N., Koloskova E.M. Sozdanie gumanizirovannykh myshey dlya farmakotoksikologicheskikh issledovaniy (uspekhi, neudachi I perspektivy) [Creation of humanized mice for pharmacotoxicological research (successes, failures and prospects)]. Biomeditsina [Journal Biomed]. 2014;1(3):4–22. (In Russian).Кондратьева Л.Г., Кашкин К.Н., Чернов И.П., Стукачева Е.А., Дидыч Д.А., Копанцев Е.П., Свердлов Е.Д. PCNA: конститутивный промотор человека для экспрессии генов в целях их функционального и генно-терапевтического использования. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2017; 3:89–92.Kondratyeva L.G., Kashkin K.N., Chernov I.P., Stukacheva E.A., Dydich D.A., Kopantzev E.P., Sverdlov E.D. PCNA: konstitutivnij promotor cheloveka dlya ekspressii genov v celyah ih phuncionalnogo I genno-terapevticheskogo ispolsovania. [PCNA: constitutive human promoter for expression of genes for their functional and therapeutic use]. Molecular Genetics, Microbiology and Virology. 2017;3:89–92. (In Rusian).Кузьминова Е.П., Чапова Р.С., Хамаганова Е.Г. Распределение частот аллелей гена HLA-C И HLA-C1, -C2 групп лигандов для KIR среди потенциальных доноров костного мозга. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2016;12(2): 291–294.Kuzminova E.P., Chapova R.S., Khamaganova E.G. Raspredelenie chastot allele gena HLA-C И HLA-C1, -C2 grupp ligandov dlya KIR sredi potencialnih donorov kostnogo mozga [Frequency distribution of alleles of the HLA-C and HLA-C1, -C2 ligand groups for KIR among potential bone marrow donors]. Mezhdunarodnyj zhurnal prikladnyh i fundamental'nyh issledovanij [International Journal of Applied and Fundamental Research]. 2016;12(2): 291–294. (In Russian).Леонов Е.А. Аллельный и гаплотипический полиморфизм HLA-генов доноров гемопоэтических стволовых клеток регистра, самоопределившихся как русские: дисс. … канд. биол. наук. М., 2022:117.Leonov E.A. Allel'nyj i gaplotipicheskij polimorfizm HLA-genov donorov gemopoeticheskih stvolovyh kletok registra, samoopredelivshihsya kak russkie [Allelic and haplotype polymorphism of HLA genes of donors of hematopoietic stem cells of the registry, self-identified as Russian]: dissertation ... Cand. Biol. Sci. Moscow, 2022:117. (In Russian).Савченко Е.С., Огнева Н.С., Каркищенко Н.Н. Эмбриологические аспекты создания новой гуманизированной трансгенной линии мышей с интегрированным геном человека HLA-A*02:01:01:01. Биомедицина. 2022;18(4):10–23.Savchenko E.S., Ogneva N.S., Karkischenko N.N. Embriologicheskie aspekty sozdaniya novoj gumanizirovannoj transgennoj linii myshej s integrirovannym genom cheloveka HLA-A*02:01:01:01 [Embryological aspects of creation a new humanized transgenic mice with integrated human HLA-A*02:01:01:01 gene]. Biomedicina [Journal Biomed]. 2022;18(4):10–23. (In Russian).Степанов В.А. Геномы, популяции, болезни: этническая геномика и персонифицированная медицина. Acta Naturae (русскоязычная версия). 2010;2(4): 18–34.Stepanov V.A. Genomi, populyacii, bolezni: etnicheskaya genomika i personificirovannaya medicina [Genomes, populations, diseases: ethnic genomics and personalized medicine]. Acta Naturae (Russian version). 2010;2(4):18–34. (In Russian).Суслова Т.А., Крохин А.А., Вавилов М.Н., Беляева С.В., Евдокимов А.В., Родионова Е.С., Султанова А.А., Чуманова Е.А., Миронова Е.А., Кофиади И.А. Генетические факторы, предрасполагающие к развитию COVID-19 (HLA, AB0, RH-HR). Вестник гематологии. 2021;17(3): 64–65.Suslova T.A., Krokhin A.A., Vavilov M.N., Belyaeva S.V., Evdokimov A.V., Rodionova E.S., Sultanova A.A., Chumanova E.A., Mironova E.A., Kofiadi I.A. Geneticheskie factori, predpolagayuzhie k razvitiyu COVID-19 (HLA, AB0, RH-HR) [Genetic factors predisposing to the development of COVID-19 (HLA, AB0, RH-HR)]. Bulletin of Hematology. 2021;17(3):64–65. (In Russian).Сычев Д.А., Шуев Г.Н., Торбенков Е.С., Адриянова М.А. Персонализированная медицина: взгляд клинического фармаколога. Consilium Medicum. 2017;19(1):61–68.Personalized medicine: clinical pharmacologistꞌs opinion]. Consilium Medicum. 2017;19(1):61–68. (In Russian).Хаитов Р.М., Алексеев Л.П., Гудима Г.О., Кофиади И.А. Аллельные варианты генов человека, затрагивающие внутриклеточный жизненный цикл ВИЧ и регулирующие иммунный ответ на ВИЧ-инфекцию. Бюллетень сибирской медицины. 2019;18(1):119–130.Khaitov R.M., Alexeev L.P., Gudima G.O., Kofiadi I.A. Allel′nie variant genov cheloveka, zatragivayushie vnutrikletochniy zhiznenniy cikl VICh i reguliruyuzhie immunniy otvet na VICh-infekciyu [Allelic variants of human HIV intracellular life cycle and regulating immune response of HIV infection]. Bulletin of Siberian Medicine. 2019;18(1):119–130. (In Russian).Хамаганова Е.Г., Абдрахимова А.Р., Леонов Е.А., Хижинский С.П., Гапонова Т.В., Савченко В.Г. Секвенирование следующего поколения в HLA-типировании больных с показаниями к трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток и их доноров. Гематология и трансфузиология. 2021;66(2):206–217.Khamaganova E.G., Abdrakhimova A.R., Leonov E.A., Khizhinskiy S.P., Gaponova T.V., Savchenko V.G. Sekvenirovanie sleduyshego pokoleniya v HLA-tipirovanii bolnih s pokazaniami k transplantacii allogennih gemopoeticheskih stvolovih kletok i ih donorov [Next generation sequencing HLA-typing of recipients and donors of allogeneic haematopoietic stem cells]. Russian Journal of Hematology and Transfusiology. 2021;66(2): 206–217. (In Russian).Alexopoulou A.N., Couchman J.R., Whiteford J.R. The CMV early enhancer/chicken β actin (CAG) promoter can be used to drive transgene expression during the differentiation of murine embryonic stem cells into vascular progenitors. BMC Cell Biol. 2008;9(2). DOI: 10.1186/1471-2121-9-2.Alexopoulou A.N., Couchman J.R., Whiteford J.R. The CMV early enhancer/chicken β actin (CAG) promoter can be used to drive transgene expression during the differentiation of murine embryonic stem cells into vascular progenitors. BMC Cell Biol. 2008;9(2). DOI: 10.1186/1471-2121-9-2.Brittain H.K., Scott R., Thomas E. The rise of the genome and personalised medicine. Clin. Med. (Lond.). 2017;17(6):545–551. DOI: 10.7861/clinmedicine.17-6-545.Brittain H.K., Scott R., Thomas E. The rise of the genome and personalised medicine. Clin. Med. (Lond.). 2017;17(6):545–551. DOI: 10.7861/clinmedicine.17-6-545.Gray S.J., Foti S.B., Schwartz J.W., Bachaboina L., Taylor-Blake B., Coleman J., Ehlers M.D., Zylka M.J., McCown T.J., Samulski R.J. Optimizing promoters for recombinant adeno-associated virus-mediated gene expression in the peripheral and central nervous system using self-complementary vectors. Hum. Gene Ther. 2011;22(9):1143–1153. doi: 10.1089/hum.2010.245.Gray S.J., Foti S.B., Schwartz J.W., Bachaboina L., Taylor-Blake B., Coleman J., Ehlers M.D., Zylka M.J., McCown T.J., Samulski R.J. Optimizing promoters for recombinant adeno-associated virus-mediated gene expression in the peripheral and central nervous system using self-complementary vectors. Hum. Gene Ther. 2011;22(9):1143–1153. doi: 10.1089/hum.2010.245.Kitpoka P., Tammakorn C., Chaisri S., Leelayuwat C., et al. Genetic profiles of killer-cell immunoglobulin-like receptors and HLA ligands in Thai blood donors. Human Immunology. 2016;77:470–475. doi: 10.1016/j.humimm.2016.04.019.Kitpoka P., Tammakorn C., Chaisri S., Leelayuwat C., et al. Genetic profiles of killer-cell immunoglobulin-like receptors and HLA ligands in Thai blood donors. Human Immunology. 2016;77:470–475. doi: 10.1016/j.humimm.2016.04.019.Marshall S., Madabushi R., Manolis E., Krudys K., Staab A., Dykstra K., Visser S.A.G. Model-Informed Drug Discovery and Development: Current Industry Good Practice and Regulatory Expectations and Future Perspectives. CPT Pharmacometrics Syst. Pharmacol. 2019;8(2):87–96. DOI: 10.1002/psp4.12372.Marshall S., Madabushi R., Manolis E., Krudys K., Staab A., Dykstra K., Visser S.A.G. Model-Informed Drug Discovery and Development: Current Industry Good Practice and Regulatory Expectations and Future Perspectives. CPT Pharmacometrics Syst. Pharmacol. 2019;8(2):87–96. DOI: 10.1002/psp4.12372.Powell S.K., Rivera-Soto R., Gray S.J. Viral expression cassette elements to enhance transgene target specificity and expression in gene therapy. Discov. Med. 2015;19(102):49–57.Powell S.K., Rivera-Soto R., Gray S.J. Viral expression cassette elements to enhance transgene target specificity and expression in gene therapy. Discov. Med. 2015;19(102):49–57.Shkurnikov M., Nersisyan S., Jankevic T., Galatenko A., Gordeev I., Vechorko V., Tonevitsky A. Association of HLA Сlass I Genotypes With Severity of Coronavirus Disease-19. Front. Immunol. 2021;12:641900. DOI: 10.3389/fimmu.2021.641900.Shkurnikov M., Nersisyan S., Jankevic T., Galatenko A., Gordeev I., Vechorko V., Tonevitsky A. Association of HLA Сlass I Genotypes With Severity of Coronavirus Disease-19. Front. Immunol. 2021;12:641900. DOI: 10.3389/fimmu.2021.641900.Wang W., Jia Y.L., Li Y.C., Jing C.Q., Guo X., Shang X.F., Zhao C.P., Wang T.Y. Impact of different promoters, promoter mutation, and an enhancer on recombinant protein expression in CHO cells. Scientific Reports. 2017;8:10416.Wang W., Jia Y.L., Li Y.C., Jing C.Q., Guo X., Shang X.F., Zhao C.P., Wang T.Y. Impact of different promoters, promoter mutation, and an enhancer on recombinant protein expression in CHO cells. Scientific Reports. 2017;8:10416.Yang C.Q., Li X.Y., Li Q., Fu S.L., Li H., Guo Z.K., Lin J.T., Zhao S.T. Eval-uation of three different promoters driving gene expression in developing chicken embryo by using in vivo electroporation. Genet. Mol. Res. 2014;13:1270–1277.Yang C.Q., Li X.Y., Li Q., Fu S.L., Li H., Guo Z.K., Lin J.T., Zhao S.T. Eval-uation of three different promoters driving gene expression in developing chicken embryo by using in vivo electroporation. Genet. Mol. Res. 2014;13:1270–1277.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.