scbmtБИОМЕДИЦИНАJournal Biomed2074-59822713-0428Scientific center of biomedical technologies of Federal Medical and Biological Agency10.33647/2074-5982-21-1-46-57scbmt-1699Research ArticleМЕТОДЫ И ТЕХНОЛОГИИ БИОМЕДИЦИНСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙMETHODS AND TECHNOLOGIES OF BIOMEDICAL RESEARCHСравнение продуцентов афлиберцепта, полученных на основе клеточных линий СНО и СНО-GSComparison of Aflibercept Producers Derived from СНО and СНО-GS Cell LinesТимоноваС. С.TimonovaS. S.

Тимонова Софья Сергеевна

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Sofya S. Timonova

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

timonova1993@yandex.ruКирикИ. А.KirikI. A.

Кирик Инесса Анатольевна

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Inessa A. Kirik

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

Kirik@ibcgenerium.ruЗариповаД. Т.ZaripovaD. T.

Зарипова Долия Тагировна

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Dolia T. Zaripova

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

zaripova@ibcgenerium.ruФарсиеваР. И.FarsievaR. I.

Фарсиева Регина Ильгизовна

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Regina I. Farsieva

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

farsieva@ibcgenerium.ruКаргополовИ. А.KargopolovI. A.

Каргополов Иван Андреевич

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Ivan A. Kargopolov

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

kargopolov96@mail.ruАнисимовР. Л.AnisimovR. L.

Анисимов Роман Львович

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Roman L. Anisimov

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

Anisimov@ibcgenerium.ruПискуновА. А.PiskunovA. A.

Пискунов Александр Александрович

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Alexander A. Piskunov

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

Piskunov@ibcgenerium.ruХамитовР. А.KhamitovR. A.

Хамитов Равиль Авгатович

601125, Владимирская обл., Петушинский р-н,  п. Вольгинский, ул. Владимирская, 14

Ravil A. Khamitov

601125, Vladimir Region, Petushinskiy District, Vol'ginskiy Village, Vladimirskaya Str., 14

Khamitov@ibcgenerium.ruАО «ГЕНЕРИУМ»РоссияGENERIUMRussian Federation2025210420252114657Copyright © Тимонова С.С., Кирик И.А., Зарипова Д.Т., Фарсиева Р.И., Каргополов И.А., Анисимов Р.Л., Пискунов А.А., Хамитов Р.А., 20252025Тимонова С.С., Кирик И.А., Зарипова Д.Т., Фарсиева Р.И., Каргополов И.А., Анисимов Р.Л., Пискунов А.А., Хамитов Р.А.Timonova S.S., Kirik I.A., Zaripova D.T., Farsieva R.I., Kargopolov I.A., Anisimov R.L., Piskunov A.A., Khamitov R.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.scbmt.ru/jour/article/view/1699

Тип селекционного маркера и условия селекции являются одними из ключевых стадий при получении продуцентов, экспрессирующих рекомбинантные белки. Получение клеточных линий — продуцентов афлиберцепта на основе клеток линии СНО и CHO-GS позволит сравнить и выявить наиболее подходящий вариант клеточной линии для получения препарата. В результате работы получены по 10 моноклональных клеточных линий — продуцентов предполагаемого биоаналога афлиберцепта на клеточных платформах СНО и СНО-GS. Продуктивность на 15 сут периодического культивирования с подпиткой двух групп составила до 2,5 г/л. Наблюдали увеличение удельной клеточной продуктивности продуцентов с использованием платформы СНО-GS. Вывод: применение линии СНО-GS, ауксотрофной по глутамину, более предпочтительно, т. к. сравнимый выход целевого бел ка достигается при более низкой концентрации жизнеспособных клеток, что благоприятно скажется в дальнейшем на этапах очистки и выделения целевого белка.

When creating cell lines expressing recombinant proteins, the type of selection marker and selection conditions are of essential importance. In this work, we aim to obtain and compare cell lines based on CHO and CHO-GS as potential aflibercept producers to identify the most suitable cell line for obtain ing an aflibercept biosimilar. As a result, 10 monoclonal cell lines-producers of a potential aflibercept biosimilar were obtained based on СНО and CHO-GS cell platforms. In the two groups, the productivity on the 15th day of periodic cultivation with feeding achieved 2.5 g/L. The СНО-GS group showed an in crease in the specific cell productivity of aflibercept producers. The conclusion is made that the СНО-GS glutamine auxotroph line is a more preferable option. This cell line enables a comparable yield of target protein at lower concentrations of  viable cells, which has a favorable effect on further stages of purification and isolation of target protein.

клетки яичника китайского хомякаСНОполучение клеточных линийауксотрофия по глутаминуафлиберцептChinese hamster ovary cellsCHOcell line developmentglutamine auxotrophic lineafliberceptпубликация подготовлена в рамках разработки лекарственного препарата афлиберцепт в АО «ГЕНЕРИУМ». публикация подготовлена в рамках разработки лекарственного препарата афлиберцепт в АО «ГЕНЕРИУМ».this publication was prepared as part of the development of the drug aflibercept at GENERIUM JSC.ReferencesТимонова С.С., Павелко В.И., Кирик И.А., Бадэ В.Н., Малыгина Т.О., Хамитов Р.А., Писку нов А.А. Принцип оперативного выбора лидерных клонов-продуцентов моноклональных антител при создании стабильных клеточных линий на основе СНО. Биотехнология. 2019;35(4):65–72. DOI: 10.21519/0234-2758-2019-35-4-65-72.Timonova S.S., Pavelko V.I., Kirik I.A., Bade V.N., Malygina T.O., Khamitov R.A., Piskunov A.A. Princip operativnogo vybora lidernyh klonov-producentov monoklonal`nyh antitel pri sozdanii stabil`nyh kle tochnyh linij na osnove CHO [Principle of express se lection of leading producing clones of monoclonal an tibodies in the development of stable CHO-based cell lines]. Biotechnology. 2019;35(4):65–72 (In Russian). DOI: 10.21519/0234-2758-2019-35-4-65-72.Adams B.S., Sorhaitz W., Stringham J. Aflibercept. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing LLC, 2025.Adams B.S., Sorhaitz W., Stringham J. Aflibercept. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing LLC, 2025.Cheng G., Ning J., Ahmed S., Huang J., Ullah R., An B., Hao H., Dai M., Huang L., Wang X., Yuan Z. Selection and dissemination of antimicrobial resis tance in Agri-food production. Antimicrob Resist Infect Control. 2019;8:158.Cheng G., Ning J., Ahmed S., Huang J., Ullah R., An B., Hao H., Dai M., Huang L., Wang X., Yuan Z. Selection and dissemination of antimicrobial resis tance in Agri-food production. Antimicrob Resist Infect Control. 2019;8:158.Dong W.R., Xiang L.X., Shao J.Z. Novel antibiotic-free plasmid selection system based on complementation of host auxotrophy in the NAD de novo synthesis path way. Appl Environ Microbiol. 2010;76(7):2295–2303.Dong W.R., Xiang L.X., Shao J.Z. Novel antibiotic-free plasmid selection system based on complementation of host auxotrophy in the NAD de novo synthesis path way. Appl Environ Microbiol. 2010;76(7):2295–2303.Fann C.H., Guirgis F., Chen G., Lao M.S., Piret J.M. Limitations to the amplification and stability of hu man tissue-type plasminogen activator expression by Chinese hamster ovary cells. Biotechnol Bioeng. 2000;69(2):204–212.Fann C.H., Guirgis F., Chen G., Lao M.S., Piret J.M. Limitations to the amplification and stability of hu man tissue-type plasminogen activator expression by Chinese hamster ovary cells. Biotechnol Bioeng. 2000;69(2):204–212.Foley J.E., Maeder M.L., Pearlberg J., Joung J.K., Peterson R.T., Yeh J.R. Targeted mutagenesis in zebrafish using customized zinc-finger nucleases. Nat. Protoc. 2009;4(12):1855–1867.Foley J.E., Maeder M.L., Pearlberg J., Joung J.K., Peterson R.T., Yeh J.R. Targeted mutagenesis in zebrafish using customized zinc-finger nucleases. Nat. Protoc. 2009;4(12):1855–1867.Klümper U., Recker M., Zhang L., Yin X., Zhang T., Buckling A., Gaze W.H. Selection for antimicrobial resistance is reduced when embedded in a natural mi crobial community. ISME J. 2019;13(12):2927–2937.Klümper U., Recker M., Zhang L., Yin X., Zhang T., Buckling A., Gaze W.H. Selection for antimicrobial resistance is reduced when embedded in a natural mi crobial community. ISME J. 2019;13(12):2927–2937.Lanzetta P., Korobelnik J.F., Heier J.S., Leal S., Holz F.G., Clark W.L., Eichenbaum D., Iida T., Xiaodong S., Berliner A.J., Schulze A., Schmelter T., Schmidt-Ott U., Zhang X., Vitti R., Chu K.W., Reed K., Rao R., Bhore R., Cheng Y., Sun W., Hirshberg B., Yancopoulos G.D., Wong T.Y., PULSAR Investigators. Intravitreal aflibercept 8 mg in neovascular age-relat ed macular degeneration (PULSAR): 48-week results from a randomised, double-masked, non-inferiority, phase 3 trial. Lancet. 2024;403(10432):1141–1152.Lanzetta P., Korobelnik J.F., Heier J.S., Leal S., Holz F.G., Clark W.L., Eichenbaum D., Iida T., Xiaodong S., Berliner A.J., Schulze A., Schmelter T., Schmidt-Ott U., Zhang X., Vitti R., Chu K.W., Reed K., Rao R., Bhore R., Cheng Y., Sun W., Hirshberg B., Yancopoulos G.D., Wong T.Y., PULSAR Investigators. Intravitreal aflibercept 8 mg in neovascular age-relat ed macular degeneration (PULSAR): 48-week results from a randomised, double-masked, non-inferiority, phase 3 trial. Lancet. 2024;403(10432):1141–1152.Liberski S., Wichrowska M., Kocięcki J. Aflibercept versus Faricimab in the Treatment of Neovascular Age-Related Macular Degeneration and Diabetic Macular Edema: A Review. Int. J. Mol. Sci. 2022;23 (16):9424.Liberski S., Wichrowska M., Kocięcki J. Aflibercept versus Faricimab in the Treatment of Neovascular Age-Related Macular Degeneration and Diabetic Macular Edema: A Review. Int. J. Mol. Sci. 2022;23 (16):9424.Lin P.C., Chan K.F., Kiess I.A., Tan J., Shahreel W., Wong S.Y., Song Z. Attenuated glutamine syn thetase as a selection marker in CHO cells to effi ciently isolate highly productive stable cells for the production of antibodies and other biologics. MAbs. 2019;11(5):965–976.Lin P.C., Chan K.F., Kiess I.A., Tan J., Shahreel W., Wong S.Y., Song Z. Attenuated glutamine syn thetase as a selection marker in CHO cells to effi ciently isolate highly productive stable cells for the production of antibodies and other biologics. MAbs. 2019;11(5):965–976.Pallavicini M.G., DeTeresa P.S., Rosette C., Gray J.W., Wurm F.M. Effects of methotrexate on transfected DNA stability in mammalian cells. Mol. Cell Biol. 1990;10(1):401–404. 12. Pana M., ed. Antibiotic resistant bacteria: A continu ous challenge in the new millennium. Rijeka, Croatia: InTech, 2012:531–548.Pallavicini M.G., DeTeresa P.S., Rosette C., Gray J.W., Wurm F.M. Effects of methotrexate on transfected DNA stability in mammalian cells. Mol. Cell Biol. 1990;10(1):401–404. 12. Pana M., ed. Antibiotic resistant bacteria: A continu ous challenge in the new millennium. Rijeka, Croatia: InTech, 2012:531–548.Peubez I., Chaudet N., Mignon C., Hild G., Husson S., Courtois V., De Luca K., Speck D., Sodoyer R. Antibiotic-free selection in E. coli: new considerations for optimal design and improved production. Microb Cell Fact. 2010;9:65.Peubez I., Chaudet N., Mignon C., Hild G., Husson S., Courtois V., De Luca K., Speck D., Sodoyer R. Antibiotic-free selection in E. coli: new considerations for optimal design and improved production. Microb Cell Fact. 2010;9:65.Ryu A.H., Eckalbar W.L., Kreimer A., Yosef N., Ahituv N. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene ex pression and regulation. Sci Rep. 2017;7(1):7533.Ryu A.H., Eckalbar W.L., Kreimer A., Yosef N., Ahituv N. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene ex pression and regulation. Sci Rep. 2017;7(1):7533.Santiago Y., Chan E., Liu P.Q., Orlando S., Zhang L., Urnov F.D., Holmes M.C., Guschin D., Waite A., Miller J.C., Rebar E.J., Gregory P.D., Klug A., Collingwood T.N. Targeted gene knockout in mam malian cells by using engineered zinc-finger nucleases. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105(15):5809–5814.Santiago Y., Chan E., Liu P.Q., Orlando S., Zhang L., Urnov F.D., Holmes M.C., Guschin D., Waite A., Miller J.C., Rebar E.J., Gregory P.D., Klug A., Collingwood T.N. Targeted gene knockout in mam malian cells by using engineered zinc-finger nucleases. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105(15):5809–5814.Yildirim M.E., Karadurmuş N., Ökten İ.N., Türk H.M., Urakçı Z., Arslan Ç., Çelik S., Dane F., Şendur M.A.N., Bilir C., Karabulut B., Cicin İ., Çubukçu E., Karaca M., Ozcelik M., Artaç M., Tanrikulu E., Alacacioglu A., Açıkgöz Ö., Öven B., Geredeli Ç., Çil T., Harputluoğlu H., Kefeli U., Bozkurt O., Tural D., Sakin A., Yalçın Ş., Gumus M. Real-world treatment outcomes from nationwide Onco-colon Turkey registry in RAS wild-type patients treated with biologics second-line mCRC. J. Oncol. Pharm. Pract. 2024:10781552241241004.Yildirim M.E., Karadurmuş N., Ökten İ.N., Türk H.M., Urakçı Z., Arslan Ç., Çelik S., Dane F., Şendur M.A.N., Bilir C., Karabulut B., Cicin İ., Çubukçu E., Karaca M., Ozcelik M., Artaç M., Tanrikulu E., Alacacioglu A., Açıkgöz Ö., Öven B., Geredeli Ç., Çil T., Harputluoğlu H., Kefeli U., Bozkurt O., Tural D., Sakin A., Yalçın Ş., Gumus M. Real-world treatment outcomes from nationwide Onco-colon Turkey registry in RAS wild-type patients treated with biologics second-line mCRC. J. Oncol. Pharm. Pract. 2024:10781552241241004.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.