scbmtБИОМЕДИЦИНАJournal Biomed2074-59822713-0428Scientific center of biomedical technologies of Federal Medical and Biological Agency10.33647/2074-5982-21-2-27-36scbmt-1713Research ArticleБИОТЕХНОЛОГИИ В БИОМЕДИЦИНЕBIOTECHNOLOGIES IN BIOMEDICINEМодификация методики определения антиальфа-стафилолизина в плазме человека для фракционирования, осадке II+III и иммуноглобулиновых препаратахModification of Determination Method for Staphylococcus Alpha Antitoxin in Human Plasma for Fractionation, II + III Precipitate and Immunoglobulin PreparationsРосинаЕ. В.RosinaE. V.

Росина Елена Владимировна 

610027, Кировская обл., Киров, Красноармейская ул., 72

Elena V. Rosina 

610027, Kirov Region, Kirov, Krasnoarmeyskaya Str., 72

rosina@niigpk.ruКалининаЕ. Н.KalininaE. N.

Калинина Елена Николаевна 

610027, Кировская обл., Киров, Красноармейская ул., 72

Elena N. Kalinina 

610027, Kirov Region, Kirov, Krasnoarmeyskaya Str., 72

kalininaen@niigpk.ruЗиганшинаС. Е.ZiganshinaS. E.

Зиганшина Светлана Евгеньевна 

610027, Кировская обл., Киров, Красноармейская ул., 72

Svetlana E. Ziganshina 

610027, Kirov Region, Kirov, Krasnoarmeyskaya Str., 72

ziganshina@niigpk.ruКоноваловаЕ. А.KonovalovaE. A.

Коновалова Екатерина Анатольевна 

610027, Кировская обл., Киров, Красноармейская ул., 72

Ekaterina A. Konovalova 

610027, Kirov Region, Kirov, Krasnoarmeyskaya Str., 72

konovalovaea@niigpk.ruКормщиковаЕ. С.KormschikovaE. S.

Кормщикова Елена Сергеевна, к.б.н. 

610027, Кировская обл., Киров, Красноармейская ул., 72

Elena S. Kormschikova, Cand. Sci. (Biol.)

610027, Kirov Region, Kirov, Krasnoarmeyskaya Str., 72

kormschikova@niigpk.ruФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови ФМБА России»РоссияKirov Research Institute of Hematology and Blood Transfusion of the Federal Medical and Biological Agency of RussiaRussian Federation2025040720252122736Copyright © Росина Е.В., Калинина Е.Н., Зиганшина С.Е., Коновалова Е.А., Кормщикова Е.С., 20252025Росина Е.В., Калинина Е.Н., Зиганшина С.Е., Коновалова Е.А., Кормщикова Е.С.Rosina E.V., Kalinina E.N., Ziganshina S.E., Konovalova E.A., Kormschikova E.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.scbmt.ru/jour/article/view/1713

Для комплексного лечения стафилококковой инфекции применяют иммуноглобулины нормальный или противостафилококковый, иммуноспецифическую плазму, эффективность которых зависит от концентрации антиальфа-стафилолизина. Показатель определяют в готовых иммуноглобулиновых препаратах и в плазме, используемой для их получения. В ходе производственного процесса также важно оценивать специфическую активность осадка II+III. Существующая методика определения антиальфа-стафилолизина предназначена для контроля качества плазмы человека для фракционирования, иммуноглобулинов человека нормального и специфического. Информация о ее применении для тестирования осадка II+III отсутствует. Актуальной задачей является повышение точности и расширение области применения методики определения антиальфа-стафилолизина для тестирования фракции II+III. Цель работы состояла в модификации методики определения антиальфа-стафилолизина в плазме человека для фракционирования, осадке II+III и иммуноглобулиновых препаратах. Специфическую активность оценивали в соответствии с ОФС.1.8.2.0008.15. В ходе модификации определен диапазон значений оптической плотности при установлении лимита гемолитического действия токсина. Подобраны условия анализа осадка II+III. Предложена схема разведения образцов с дискретностью 1 МЕ/мл. Доказана специфичность выявления антител, подтверждены сходимость, линейность и правильность модифицированной методики. Модификация методики расширила область ее применения за счет тестирования осадка II+III, повысила точность оценки путем снижения дискретности определения и исключения субъективности визуальной оценки при определении лимита гемолитического действия токсина. Подтверждены пригодность модифицированной методики для контроля качества сырья и готовой продукции.

Complex treatment of staphylococcal infection is carried out using normal immunoglobulins, antistaphylococcal immunoglobulin, and immunospecific plasma. Their effectiveness depends on the concentration of staphylococcus alpha antitoxin. This indicator is determined in immunoglobulin preparations and in the plasma used for their production. During the production process, the potency of the intermediate – II+III precipitate – should be precisely evaluated. The existing method for determining staphylococcus alpha antitoxin is intended for monitoring the quality of plasma for fractionation, determination of normal and specific human immunoglobulins. The information about the possibility of its use for testing II+III precipitate is currently lacking. The task of increasing the accuracy and extending the application scope of the existing method for determining staphylococcus alpha antitoxin for testing II + III precipitate appears highly relevant. In this study, we aimed to modify the method for determining staphylococcus alpha antitoxin in plasma for fractionation, II+III precipitate and immunoglobulin preparations. The assessment of the potency was carried out in accordance with Pharmacopoeia. The method of quantitative determination of staphylococcus alpha antitoxinin human plasma for fractionation, II+III precipitate and readymade immunoglobulin preparations was modified. The range of optical density values at the stage of setting the limit of the hemolytic effect of the toxin was determined. The conditions for testing II+III precipitate were selected. A dilution scheme of the samples with a discreteness of 1 IU/ml was proposed. The specificity of antibody detection in samples was confirmed. The convergence linearity and correctness of the modified method was established. The implemented modification of the method extended the scope of its application due to the possibility of testing II+III precipitate. The accuracy of assessing the content of staphylococcus alpha antitoxin was increased by reducing the discreteness of determination and eliminating the subjectivity of visual assessment of the limit of the hemolytic action of the toxin. The result of determination of metrological characteristics showed the suitability of the modified method for quality control of raw materials and finished products.

антиальфа-стафилолизинспецифическая активностьплазма человека для фракционированияосадок II+IIIиммуноглобулин человекаantialphastaphylolysinspecific activityhuman plasma for fractionationII+III precipitatehuman immunoglobulinReferencesАбаев И.В., Скрябин Ю.П., Коробова О.В. и др. Сравнение гемолитической активности и генов гемолитических токсинов клинических штаммов Staphylococcus aureus, изолированных на территории РФ. Клиническая лабораторная диагностика. 2019;64(5):294–298. DOI: 10.18821/0869-2084-2019-64-5-294-298.Abaev I.V., Skryabin Yu.P., Korobova O.V., et al. Sravnenie gemoliticheskoj activnosti i genov gemoliticheskih tocsinov klinicheskikh shtammov Staphylococcus aureus, isolirovannykh na territorii RF [Comparison of hemolytic activity and hemolytic toxin genes of clinical strains of Staphylococcus aureus isolated in the Russian Federation]. Clinical laboratory diagnostics. 2019;64(5):294–298. (In Russian). DOI: 10.18821/0869-2084-2019-64-5-294-298.Абакумова Т.В., Генинг Т.П., Михайлова Н.Л. и др. Физиология крови. Уч. пособ. к практическим занятиям по нормальной физиологии для студентов медицинского факультета. Ульяновск: УлГУ, 2017:58.Abakumova T.V., Gening T.P., Mikhailova N.L., et al. Fisiologija krovi [Physiology of blood]. Uch. posob. k prakticheskim zanjatijam po normalnoy fiziologii dlja studentov medicinskikh vusov [Textbook for practical classes in normal physiology for students of the Faculty of Medicine]. Ulyanovsk: UlGU, 2017:58. (In Russian).Буйлова И.А., Савкина М.В., Саяпина Л.В. и др. Оценка современного состояния фармацевтической разработки противостафилококковых профилактических препаратов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2024;101(4):560–572. DOI: 10.36233/0372-9311-512.Буйлова И.А., Савкина М.В., Саяпина Л.В. и др. Оценка современного состояния фармацевтической разработки противостафилококковых профилактических препаратов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2024;101(4):560–572. DOI: 10.36233/0372-9311-512.Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1998:459.Glanz S. Mediko-biologicheskaja statistika [Medical and biological statistics]. Moscow: Praktika Publ., 1998:459. (In Russian).Инструкция по медицинскому применению препарата «Анатоксин стафилококковый адсорбированный».Instrucciya po medicinskomu primeneniyu preparata “Anatoksin stafilococcovyj adsorbirovannyj” [Instruction for medical use of the drug “Staphylococcal anatoxin adsorbed”.Николаева И.В., Анохин В.А. Стафилококковые инфекции в педиатрии. Практическая медицина. 2010;1(40):24–27.Nicolaeva I.V., Anochin V.A. Stafilococcovye infeccii v pediatrii [Staphylococcal infections in pediatrics]. Practicheskaya medicina [Practical medicine]. 2010;1(40):24–27. (In Russian).Общая фармакопейная статья ОФС.1.8.2.0008.15 «Определение содержания антиальфастафилолизина (специфических антител) в лекарственных препаратах из сыворотки крови человека и животных». Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV изд. 2018;2:3183–3192.Obshhaya farmacopejnaya statya OFS.1.8.2.0008.15 “Opredelenie soderzhaniya antialfastafilolisina (specificheskikh antitel) v lekarstvennykh preparatakh iz syvorotki krovi cheloveka i zhivotnykh” [“Determination of the content of antialphastaphylolysin (specific antibodies) in medicinal preparations from human and animal blood serum”]. Gosudarstvennaya Farmacopeya Rossijskoy Federacii [State Pharmacopoeia of the Russian Federation]. XIV ed. 2018;2:3183–3192. (In Russian).Общая фармакопейная статья ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методик». Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV изд. 2018;1:276–288. [Obshhaya farmacopejnaya statya OFS.1.1.0012.15 “Validaciya analiticheskikh metidic”Obshhaya farmacopejnaya statya OFS.1.1.0012.15 “Validaciya analiticheskikh metidic” [“Validation of analytical methods”]. Gosudarstvennaya Farmacopeya Rossijskoy Federacii [Pharmacopoeia of the Russian Federation]. XIV ed. 2018;1:276–288. (In Russian).Скрипай Л.А., Вильянинов В.И., Бельгесов Н.В. Применение иммунной плазмы при лечении пациентов с бактериальными инфекциями и иммуносупрессией. Вестник гематологии. 2022;18(1):56.Skripay L.A., Vilyaninov V.I., Belgesov N.V. Primenenie immunnoy plazmy pri lechenii pacientov s bacterialnymi infekciyami i immunosupressiey [Use of immune plasma in the treatment of patients with bacterial infections and immunosuppression]. Vestnic gematologii [Bulletin of Hematology]. 2022;18(1):56. (In Russian).Фармакопейная статья ФС.3.3.2.0007.15 «Иммуноглобулин человека нормальный». Государственная Фармакопея Российской Федерации.XIV изд. 2018;2: 5758–5763. [Farmacopejnaya statya FS.3.3.2.0007.15 “Immunoglobulin cheloveka normalnyj”Farmacopejnaya statya FS.3.3.2.0007.15 “Immunoglobulin cheloveka normalnyj” [“Normal human immunoglobulin”]. Gosudarstvennaya Farmacopeya Rossijskoy Federacii [Pharmacopoeia of the Russian Federation]. XIV ed. 2018;2:5758-5763. (In Russian).Фармакопейная статья ФС.3.3.2.0009.19 «Иммуноглобулин человека противостафилококковый». Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV изд. 2018;2:5771-5775.Farmacopejnaya statya FS.3.3.2.0009.19 “Immunoglobulin cheloveka protivostafilococcovyj” [“Human anti-staphylococcal immunoglobulin”]. Gosudarstvennaya Farmacopeya Rossijskoy Federacii [State Pharmacopoeia of the Russian Federation]. XIVed. 2018;2:5771–5775. (In Russian).Clegg J., Soldaini E., McLoughlin R.M., et al. Staphylococcus aureus vaccine research and development: the past, present and future, including novel therapeutic strategies. Frontiers in Immunology. 2021;12:705360. DOI: 10.3389/fimmu.2021.705360.Clegg J., Soldaini E., McLoughlin R.M., et al. Staphylococcus aureus vaccine research and development: the past, present and future, including novel therapeutic strategies. Frontiers in Immunology. 2021;12:705360. DOI: 10.3389/fimmu.2021.705360.Francois B., Barraud O., Jafri H.S. Antibody-based therapy to combat Staphylococcus aureus infections. Clinical Microbiology and Infection. 2017;23:219– 221. DOI: 10.1016/j.cmi.2017.02.035.Francois B., Barraud O., Jafri H.S. Antibody-based therapy to combat Staphylococcus aureus infections. Clinical Microbiology and Infection. 2017;23:219– 221. DOI: 10.1016/j.cmi.2017.02.035.Kelly J. Immunotherapy against antibiotic-resistant bacteria: the Russian experience with an antistaphylococcal hyperimmune plasma and immunoglobulin. Microbes and infection. 2000;2:1383–1392. DOI: 10.1016/S1286-4579(00)01292-2.Kelly J. Immunotherapy against antibiotic-resistant bacteria: the Russian experience with an antistaphylococcal hyperimmune plasma and immunoglobulin. Microbes and infection. 2000;2:1383–1392. DOI: 10.1016/S1286-4579(00)01292-2.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.