Preview

БИОМЕДИЦИНА

Расширенный поиск

Молекулярно-генетические аспекты технологии получения трансгенных мышей с интегрированными генами N-ацетилтрансферазы (NAT1 и NAT2) человека

Полный текст:

Аннотация

В ходе работы были созданы ДНК-конструкции, включающие нуклеотидные последовательности генов NAT1 и NAT2 человека и промоторно-энхансерную область гена альбумина мыши. Кодирующие части генов NAT1 и NAT2 были амплифицированы с матрицы геномной ДНК человека с использованием олигонуклеотидов NAT1-Not и NAT1-Xho в случае NAT1 и NAT2-Not и NAT2-Xho - в случае NAT2 . Плазмиды pSI-NAT1 и pSI-NAT2 расщепляли эндонуклеазами BamHI и EcoRV (сайт рестрикции EcoRV был введен в олигонуклеотид enAlb-F). Параллельно осуществлялся синтез олигонуклеотидных праймеров и детекция экспрессии генов у людей и создаваемых трансгенных животных с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. На следующих этапах осуществлялось выделение ДНК/РНК из пробы плазмы крови, амплификация геномной ДНК, идентификация ПЦР-продуктов методом горизонтального электрофореза. Наличие в геле полоски ДНК соответствующего размера свидетельствовало о наличии в образце искомого гена. Получены трансгенные мыши (F0) с интегрированными в их геном конструкциями, включающими нуклеотидные последовательности генов NAT1 и NAT2 человека под промотором гена альбумина мыши. Общая эффективность трансгеноза составила для гена NAT1 - 1,1% и для NAT2 - 0,6%. Анализ интеграции трансгенов в различных органах и тканях у потомков (F1) первичных трансгенных мышей (F0) показал, что встраивание генов NAT1 и NAT2 человека произошло во все три зародышевых листка.

Об авторах

В. Н. Каркищенко
ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»
Россия


В. П. Рябых
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных»
Россия


Н. Н. Каркищенко
ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»
Россия


М. С. Дуля
ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»
Россия


В. А. Езерский
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных»
Россия


Е. М. Колоскова
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных»
Россия


В. Н. Лазарев
ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»
Россия


С. В. Максименко
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных»
Россия


Н. В. Петрова
ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий ФМБА России»
Россия


В. Н. Столярова
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных»
Россия


Т. П. Трубицина
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания животных»
Россия


Список литературы

1. Езерский В.А., Тевкин С.И., Трубицина Т.П., Колоскова Е.М., Шишиморова М.С., Безбородова О.А., Якубовская Р.И., Рябых В.П. Интеграция и тканеспецифическая экспрессия гена лактоферрина человека в молочной железе трансгенных кроликов // Проблемы биологии продуктивных животных. 2013. № 4. С. 33-52.

2. Каркищенко Н.Н., Рябых В.П., Каркищенко В.Н., Колоскова Е.М. Создание гуманизированных мышей для фармакотоксилогических исследований (успехи, неудачи и перспективы) // Биомедицина. 2014. № 3. С. 4-22.

3. Каркищенко Н.Н., Петрова Н.В., Слободенюк В.В. Высокоспецифичные видовые праймеры к генам NAT1 и NAT2 для сравнительных исследований у человека и лабораторных животных // Биомедицина. 2014. № 2. С. 4- 17.

4. Blin N., Stafford D.W. A general method for isolation of high molecular weight DNA from eukaryotes // Nucleic acids res. 1976. No. 3(9). Pp. 2303-8.

5. Boukouvala S., Fakis G. Arylamine N-acetyltransferases: what we learn from genes and genomes // Drug metabolism reviews. 2005. No. 37. Pp. 511-564.

6. Butcher N.J., Arulpragasam A., Goh H.L., Davey T., Minchin R.F. Human arylamine N-acetyltransferase-1 interacts with EHZF, a multi-functional transcription co-factor // In: Third International Workshop on Arylamine N-acetyltransferases. -Vancouver, Canada. 2004.

7. Cao W., Chau B., Hunter R., Strnatka D., McQueen C.A., Erickson R.P. Only low levels of exogenous N-acetyltransferase can be achieved in transgenic mice // Pharmacogenetics J. 2005. No. 5. Pp. 255-261.

8. Cornish V.A., Pinter K., Boukouvala S., Johnson N., Labrousse C., Payton M., Priddle H., Smith A.J., Sim E. Generation and analysis of mice with a targeted disruption of the arylamine N-acetyltransferase type 2 gene // Pharmacogenomics J. 2003. No. 3. Pp. 169-177.

9. Coughtrie M.W.H., Sharp S., Maxwell K., Innes N.P. Biology and function of the reversible sulfation pathway catalysed by human sulfotransferases and sulfatases // Chem.-biol. interact. 2003. No. 109. Pp. 3-27.

10. Erickson R., Morgan C., McQueen C.A. 2nd International NAT Workshop. - Eynsham, Oxford. 2000. Abstract. No. 1.

11. Green M.D., Tephly T.R. Glucuronidation of amine substrates by purified and expressed UDP-glucuronosyltransferase proteins // Drug metab. dispos. 1998. No. 26. Pp. 860-867.

12. Karolyi J., Erickson R.P., Liu S. Genetics of susceptibility to 6-aminonicotinamide-induced cleft palate in the mouse: studies in congenic and recombinant inbred strains // Teratology. 1988. No. 37. Pp. 283-287.

13. Karolyi J., Erickson R.P., Liu S., Killewald L. Major effects on teratogen-induced facial clefting in mice determined by a single genetic region // Genetics. 1990. No. 126. Pp. 201-205.

14. Leff M.A., Epstein P.N., Doll M.A., Fretland A.J., Devanaboyina U.S., Rustan T.D., Hein D.W. Prostate-specific human N-acetyltransferase 2 (NAT2) expression in the mouse // J. Pharmacol. exp. ther. 1999. No. 290(1). Pp. 182-187.

15. Nebert D.W. Polymorphisms in drug metabolising enzymes: what is their clinical relevance and why do they exist? // Am. J. hum. genet. 1997. No. 60. Pp. 265-271.

16. Nelson D.R., Koymans L., Kamataki T., Stegeman J.J., Feyereisen R., Waxman D.J., Waterman M.R., Gotoh O., Coon M.J., Estabrook R.W., Gunsalus I.C., Nebert D.W. P450 superfamily: update on new sequences, gene mapping, accession numbers and nomenclature // Pharmacogenetics. 1996. No. 6. Pp. 1-42.

17. Sim E., Pinter K., Mushtaq A., Upton A., Sandy J., Bhakta S., Noble M. Arylamine N-acetyltransferases: a pharmacogenomic approach to drug metabolism and endogenous function // Biochem. soc. trans. 2003. No. 31. Pp. 615-619.

18. Sugamori K.S., Wong S., Brenneman D., Lu X., Grant D.M. NAT3 knockout or over expression in mice has no influence on N-acetylation activity // Drug metab. rev. 2004. No. 36. 164 p.

19. Sugamori K.S., Wong S., Gaedigk A., Yu V., Abramovici H., Rozmahel R., Grant D.M. Generation and functional characterization of arylamine N-acetyltransferase Nat1/Nat2 double-knockout mice // Mol. pharmacol. 2003. No. 64. Pp. 170-179.

20. Wong L.-L. Cytochrome P450 monooxygenases // Curr. opin. chem. biol. 1998. No. 2. Pp. 263-268.


Для цитирования:


Каркищенко В.Н., Рябых В.П., Каркищенко Н.Н., Дуля М.С., Езерский В.А., Колоскова Е.М., Лазарев В.Н., Максименко С.В., Петрова Н.В., Столярова В.Н., Трубицина Т.П. Молекулярно-генетические аспекты технологии получения трансгенных мышей с интегрированными генами N-ацетилтрансферазы (NAT1 и NAT2) человека. БИОМЕДИЦИНА. 2016;(1):4-17.

For citation:


Karkischenko V.N., Ryabykh V.P., Karkischenko N.N., Dulya M.S., Ezerskiy V.A., Koloskova E.M., Lazarev V.N., Maksimenko S.V., Petrova N.V., Stolyarova V.N., Trubitsina T.P. Molecular and genetic aspects of technology of generation transgene mice with the integrated human of Nacetyltransferase genes (NAT1 and NAT2). Journal Biomed. 2016;(1):4-17. (In Russ.)

Просмотров: 39


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2074-5982 (Print)
ISSN 2074-5982 (Online)