Сравнение продуцентов афлиберцепта, полученных на основе клеточных линий СНО и СНО-GS

Тип селекционного маркера и условия селекции являются одними из ключевых стадий при получении продуцентов, экспрессирующих рекомбинантные белки. Получение клеточных линий — продуцентов афлиберцепта на основе клеток линии СНО и CHO-GS позволит сравнить и выявить наиболее подходящий вариант клеточной линии для получения препарата. В результате работы получены по 10 моноклональных клеточных линий — продуцентов предполагаемого биоаналога афлиберцепта на клеточных платформах СНО и СНО-GS. Продуктивность на 15 сут периодического культивирования с подпиткой двух групп составила до 2,5 г/л. Наблюдали увеличение удельной клеточной продуктивности продуцентов с использованием платформы СНО-GS. Вывод: применение линии СНО-GS, ауксотрофной по глутамину, более предпочтительно, т. к. сравнимый выход целевого бел ка достигается при более низкой концентрации жизнеспособных клеток, что благоприятно скажется в дальнейшем на этапах очистки и выделения целевого белка.

1. Тимонова С.С., Павелко В.И., Кирик И.А., Бадэ В.Н., Малыгина Т.О., Хамитов Р.А., Писку нов А.А. Принцип оперативного выбора лидерных клонов-продуцентов моноклональных антител при создании стабильных клеточных линий на основе СНО. Биотехнология. 2019;35(4):65–72. DOI: 10.21519/0234-2758-2019-35-4-65-72.

2. Adams B.S., Sorhaitz W., Stringham J. Aflibercept. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing LLC, 2025.

3. Cheng G., Ning J., Ahmed S., Huang J., Ullah R., An B., Hao H., Dai M., Huang L., Wang X., Yuan Z. Selection and dissemination of antimicrobial resis tance in Agri-food production. Antimicrob Resist Infect Control. 2019;8:158.

4. Dong W.R., Xiang L.X., Shao J.Z. Novel antibiotic-free plasmid selection system based on complementation of host auxotrophy in the NAD de novo synthesis path way. Appl Environ Microbiol. 2010;76(7):2295–2303.

5. Fann C.H., Guirgis F., Chen G., Lao M.S., Piret J.M. Limitations to the amplification and stability of hu man tissue-type plasminogen activator expression by Chinese hamster ovary cells. Biotechnol Bioeng. 2000;69(2):204–212.

6. Foley J.E., Maeder M.L., Pearlberg J., Joung J.K., Peterson R.T., Yeh J.R. Targeted mutagenesis in zebrafish using customized zinc-finger nucleases. Nat. Protoc. 2009;4(12):1855–1867.

7. Klümper U., Recker M., Zhang L., Yin X., Zhang T., Buckling A., Gaze W.H. Selection for antimicrobial resistance is reduced when embedded in a natural mi crobial community. ISME J. 2019;13(12):2927–2937.

8. Lanzetta P., Korobelnik J.F., Heier J.S., Leal S., Holz F.G., Clark W.L., Eichenbaum D., Iida T., Xiaodong S., Berliner A.J., Schulze A., Schmelter T., Schmidt-Ott U., Zhang X., Vitti R., Chu K.W., Reed K., Rao R., Bhore R., Cheng Y., Sun W., Hirshberg B., Yancopoulos G.D., Wong T.Y., PULSAR Investigators. Intravitreal aflibercept 8 mg in neovascular age-relat ed macular degeneration (PULSAR): 48-week results from a randomised, double-masked, non-inferiority, phase 3 trial. Lancet. 2024;403(10432):1141–1152.

9. Liberski S., Wichrowska M., Kocięcki J. Aflibercept versus Faricimab in the Treatment of Neovascular Age-Related Macular Degeneration and Diabetic Macular Edema: A Review. Int. J. Mol. Sci. 2022;23 (16):9424.

10. Lin P.C., Chan K.F., Kiess I.A., Tan J., Shahreel W., Wong S.Y., Song Z. Attenuated glutamine syn thetase as a selection marker in CHO cells to effi ciently isolate highly productive stable cells for the production of antibodies and other biologics. MAbs. 2019;11(5):965–976.

11. Pallavicini M.G., DeTeresa P.S., Rosette C., Gray J.W., Wurm F.M. Effects of methotrexate on transfected DNA stability in mammalian cells. Mol. Cell Biol. 1990;10(1):401–404. 12. Pana M., ed. Antibiotic resistant bacteria: A continu ous challenge in the new millennium. Rijeka, Croatia: InTech, 2012:531–548.

12. Peubez I., Chaudet N., Mignon C., Hild G., Husson S., Courtois V., De Luca K., Speck D., Sodoyer R. Antibiotic-free selection in E. coli: new considerations for optimal design and improved production. Microb Cell Fact. 2010;9:65.

13. Ryu A.H., Eckalbar W.L., Kreimer A., Yosef N., Ahituv N. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene ex pression and regulation. Sci Rep. 2017;7(1):7533.

14. Santiago Y., Chan E., Liu P.Q., Orlando S., Zhang L., Urnov F.D., Holmes M.C., Guschin D., Waite A., Miller J.C., Rebar E.J., Gregory P.D., Klug A., Collingwood T.N. Targeted gene knockout in mam malian cells by using engineered zinc-finger nucleases. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105(15):5809–5814.

15. Yildirim M.E., Karadurmuş N., Ökten İ.N., Türk H.M., Urakçı Z., Arslan Ç., Çelik S., Dane F., Şendur M.A.N., Bilir C., Karabulut B., Cicin İ., Çubukçu E., Karaca M., Ozcelik M., Artaç M., Tanrikulu E., Alacacioglu A., Açıkgöz Ö., Öven B., Geredeli Ç., Çil T., Harputluoğlu H., Kefeli U., Bozkurt O., Tural D., Sakin A., Yalçın Ş., Gumus M. Real-world treatment outcomes from nationwide Onco-colon Turkey registry in RAS wild-type patients treated with biologics second-line mCRC. J. Oncol. Pharm. Pract. 2024:10781552241241004.