Повышение специфичности поликлональных антител к β2-микроглобулину человека и мыши как альтернатива использованию моноклональных антител в иммунологических методах анализа

Высокоспецифичные реагенты — белки и антитела к ним — необходимые компоненты систем верификации  эффективности  функционирования  трансгенных/нокаутных  животных  биомоделей. В  частности, идентификация β2-микроглобулина мыши и человека в белковых фракциях органов и тканей трансгенных и нокаутных по гену β2-микроглобулина мышей нескольких HLA-линий, созданных в последние годы в НЦБМТ ФМБА России, является важнейшим этапом их паспортизации. На первом этапе наших исследований были получены штаммы-продуценты E. coli рекомбинантных β2-микроглобулина мыши и человека (mβ2mg и hβ2mg), белки выделены и очищены. На следующем этапе работы получены аффинные сорбенты с иммобилизованными mβ2mg и hβ2mg. Для повышения видовой специфичности сыворотки «кролик-анти-hβ2mg» были истощены против рекомбинантного белка mβ2mg, и, напротив, «кролик-анти-mβ2mg» истощали против рекомбинантного белка hβ2mg. Высокоспецифичные антитела были очищены из истощенных сывороток на аффинных сорбентах. Методами дот- и вестерн-блоттинга на примере истощенных и аффинно-очищенных антител «кролик-анти-hβ2mg» было показано значительное повышение их специфичности относительно hβ2mg.

1. Каркищенко Н.Н., Рябых В.П., Каркищенко В.Н., Колоскова Е.М. Создание гуманизированных мышей для фармакотоксикологических исследований (успехи, неудачи и перспективы). Биомедицина. 2014;1(3):4–22.

2. Каркищенко В.Н., Петрова Н.В., Савченко Е.С., Огнева Н.С., Колоскова Е.М., Максименко С.В., Манувера В.А., Бобровский П.А., Лазарев В.Н. Создание полных гибридных ДНК-конструкций с геном человека HLA-A*02:01:01:01. Биомедицина. 2021;17(1):10–23.

3. Каркищенко Н.Н., Лазарев В.Н., Манувера В.А., Бобровский П.А., Петрова Н.В., Колоскова Е.М., Глотова Е.С. Принципы создания генно-инженерной конструкции для получения гуманизированных трансгенных мышей, несущих ген HLA-С*07:02:01:01, как прообраз инновационных трансгенно-нокаутных биомоделей. Биомедицина. 2024;20(1):8–20.

4. Петрова Н.В., Скрипкина М.М. Особенности организации содержания и выведения трансгенных линий мышей в НЦБМТ ФМБА России. Биомедицина. 2021;17(3E):70–75.

5. Савченко Е.С., Огнева Н.С., Каркищенко Н.Н. Эмбриологические аспекты создания новой гуманизированной трансгенной линии мышей с интегрированным геном человека HLA-A*02:01:01:01.Биомедицина. 2022;18(4):10–23.

6. Faber E., Tshilwane S.I., Van Kleef M., Pretorius A. The impact of Escherichia coli contamination products present in recombinant African horse sickness virus serotype 4 proteins on the innate and humoral immune responses, Molecular Immunology. 2022:152:1–13. DOI: 10.1016/j.molimm.2022.09.013.

7. Loralyn A.B., Rusung T. Xenogeneic β2-Microglobulin Substitution Affects Functional Binding of MHC Class I Molecules by CD8+ T Cells. J. Immunol. 2007;179(6):3588–3595. DOI: 10.4049/jimmunol.179.6.3588.

8. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation. J. Histochem. Cytochem. 1974;22(12):1084–1091. DOI: 10.1177/22.12.1084.

9. Vaitukaitis J.L. Production of antisera with small doses of immunogen: Multiple intradermal injections. Methodsin Enzymology. 198;73:46–52.

10. Williams R.C. Jr., Malone C.C. Antigenic epitopes on beta 2-microglobulin reacting with monoclonal antibodies. J. Lab. Clin. Med. 1993;121(6):805–820.