Оценка молекулярных параметров иммуноглобулина антирабического методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

В Российской Федерации ежегодно риску заражения бешенством подвергается более 400 тыс. человек, в связи с чем антирабический иммуноглобулин является одним из наиболее часто применяемых противовирусных сывороточных препаратов. Для повышения лекарственной безопасности при использовании гетерологичного иммуноглобулина целесообразным является введение показателя качества «молекулярные параметры», отражающего распределение в препарате одиночных молекул иммуноглобулина, их димеров, агрегатов и фрагментов. Исследование содержания указанных фракций в препарате методом высокоэффективной жидкостной хроматографии определяется требованиями XIV издания Государственной Фармакопеи Российской Федерации. Цель работы состояла в определении условий проведения высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения молекулярных параметров гетерологичного антирабического иммуноглобулина. В статье предложена методика определения показателя «молекулярные параметры» с использованием колонки BioSep-SEC-s3000 («Phenomenex Inc.», США) и хроматографической системы Biologic Duoflow («BioRad», США). В качестве объекта исследования использовали производственные образцы антирабического иммуноглобулина из сыворотки крови лошади. При исследовании хроматографических параметров (разрешения между пиками, времени удерживания, симметрии пиков и др.) подобраны условия проведения анализа, удовлетворяющие фармакопейным требованиям. Значения разрешения составили: между пиками мономеров и димеров — 1,42; между пиками агрегатов и мономеров — 3,9; между пиками мономеров и фрагментов — не менее 4,46. Результаты эксперимента показали специфичность и повторяемость методики. Дополнительно показана высокая степень очистки исследуемых коммерческих образцов антирабического иммуноглобулина, которую характеризует отсутствие фракций агрегатов и фрагментов. Полученные результаты позволяют сделать вывод о возможности применения предлагаемой методики с использованием колонки BioSep-SEC-s3000 и хроматографической системы Biologic Duoflow для контроля качества гетерологичного антирабического иммуноглобулина по показателю «молекулярные параметры».

1. Абрамова Е.Г., Никифоров А.К., Киреев М.Н., Кочкалова Н.Н., Генералов С.В., Селезнёва А.Г., Савицкая Л.В., Иванов Ю.В. Определение молекулярных параметров препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина методом гельфильтрации. Проблемы особо опасных инфекций. 2010;106(4):54–57. DOI: 10.21055/0370-1069-2010-4(106)-54-57

2. Мельников С.А., Борисевич И.В., Рождественский Е.В., Пантюхов В.Б., Черникова Н.К., Гордеев Е.В., Нимирская С.А., Хмелев А.Л., Сыромятникова С.И., Шатохина И.В., Плеханова Т.М., Тиманькова Г.Д., Борисевич С.В., Кутаев Д.А., Стовба Л.Ф., Мишалова Е.Ю. Свойства гетерологичного иммуноглобулина против лихорадки Эбола после длительного хранения. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2020;20(1):50–59. DOI: 10.30895/2221-996X-2020-20-1-50-59

3. Мишалова Е.Ю., Гордеев Е.В., Лебедев В.Н., Мельников С.А., Нимирская С.А., Борисевич С.В. Апробация методики эксклюзионной хроматографии для оценки молекулярных параметров иммуноглобулина против лихорадки Эбола из сыворотки крови лошадей. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2019;19(4):261–267. DOI: 10.30895/2221-996X-2019-19-4-261-267

4. Мовсесянц А.А., Бутырский А.Ю., Бондарев В.П., Олефир Ю.В., Постнова Е.Л., Мухачева А.В. К вопросу о применении гетерологичного антирабического иммуноглобулина для специфической профилактики бешенства у людей. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2015;14(5):85–89. DOI: 10.31631/2073-3046-2015-14-5-85-89

5. Регистр лекарственных средств России.

6. Репина И.Б., Феклисова Л.В., Скляр Л.Ф., Ушакова А.Ю., Россошанская Н.В., Соловьёва Н.П. Бешенство: обзор литературы и случай из практики. Медицинский оппонент. 2023;3(23):73–80.

7. Choi C.W., Jang W., Shim S.B., Song H.J., Cho J., Moon H., Park S.M., Han K., Sohn K.H. Collaborative study for the establishment of national reference standard for molecular size distribution test of human immunoglobulin products. Yahhak HoeJi. 2021;65:223– 227. DOI: 10.17480/psk.2021.65.3.223

8. Christians S., Schluender S., van Treel N.D., BehrGross M.E. Interpretation of size-exclusion chromatography for the determination of molecular-size distribution of human immunoglobulins. Pharmeuropa Bio & Scientific Notes. 2016;2016:115–128.

9. Human normal immunoglobulin (intramuscular administration), monograph 0338. Ph. Eur. 11th ed. Strasbourg, France: Council of Europe, 2023.

10. Jiskoot W., Randolph T.W., Volkin D.B., Middaugh C.R., Schöneich C., Winter G., Friess W., Crommelin D.J., Carpenter J.F. Protein instability and immunogenicity: Roadblocks to clinical application of injectable protein delivery systems for sustained release. J. Pharm. Sci. 2012;101(3):946–954. DOI: 10.1002/jps.23018

11. Lee J.K., Deluccia F.J., Kelly E.L., Davidson C., Borger F.R. Determination of the molecular size distribution of immunoglobulin G (IgG) in intravenous IgG-albumin formulations by high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr. 1988;444:141–152. DOI: 10.1016/s0021-9673(01)94017-8

12. Roberts C.J. Therapeutic protein aggregation: Mechanisms, design, and control. Trends Biotechnol. 2014;32(7):372–380. DOI: 10.1016/j.tibtech.2014.05.005

13. Woznichak M., Vandeberg P., Russ C., Talton Ch., Srivastava J., Arora V., Merritt W.K., Jose M. Application of a caprylate/chromatography purification process for production of a high potency rabies immune globulin from pooled human plasma. J. Immunol. Methods. 2021;499:113–164. DOI: 10.1016/j.jim.2021.113164

14. Wang H., Levi M.S., Del Grosso A.V., McCormick W.M., Bhattacharyya L. An improved size exclusion-HPLC method for molecular size distribution analysis of immunoglobulin G using sodium perchlorate in the eluent. J. Pharm. Biomed. Anal. 2017;138:330–343. DOI: 10.1016/j.jpba.2017.02.025